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中藥醇沉技術的應用范圍

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詳細說明
  水提取乙醇沉淀法(簡稱醇沉法)是中藥活性成分純化與中藥制劑精制過程中常用的方法。從20世紀50年代以來,多功能提取濃縮罐醇沉法在中藥制劑生產過程中已得到廣泛應用。2010版中國藥典I部所載的成方制劑和單味制劑中,140余種是經過醇沉工藝所得。然而,醇沉法正處在中藥關鍵技術去與留的十字路口。一方面,醇沉能夠純化提取液,減少中藥的服用劑量和具有良好的成型性,被視為中藥制劑提取精制的“通則”;另一方面,醇沉卻造成了中藥有效成分的流失,影響了中藥制劑的有效性和安全性,并且存在工藝參數難以控制、醇沉過程時間長、能源材料費用大等問題。
  影響醇沉效果的因素很多,水提液濃縮溫度、相對濃度,醇沉液含醇量、乙醇添加方法,醇沉次數、醇沉溫度與時間等都會對醇沉物的品質產生影響。而在應用過程中,往往不重視醇沉的對象與效果,而套用現成的醇沉工藝進行分離純化,采用指標性成分得失為標準進行評價,使醇沉技術受到眾多垢病,而且,絮凝澄清技術、超濾技術、大孔樹脂吸附技術的興起,大有取代傳統醇沉技術的趨勢。因此,審視中藥醇沉技術的應用范圍,對醇沉效果做出客觀合理的評價,對于發揮醇沉技術優勢、發展中藥提取純化技術、發揚中醫藥特色具有十分重要的意義。
  1、生物堿類成分
  生物堿在中藥化學成分中極其重要,常用的400多味植物中藥中至少有40余味含有生物堿。生物堿大部分水溶性差,能溶于乙醇、氯仿等有機溶劑。苦參堿具有抗炎、免疫抑制等作用,張保獻等比較了不同精制方法對苦參水提取液中苦參總生物堿含量的影響,發現醇沉法精制,醇沉濃度70%,冷藏放置24h,苦參堿含量達到12.63mg/g,是其它方法的2~5倍。烏頭堿及其復方制劑具有祛風除濕、溫經止痛的功效,張風雷等以烏頭總生物堿含量與總生物堿收率為考察指標,通過正交設計研究了附子水提醇沉工藝,確定醇沉工藝為水提取液濃縮至相對濃度0.75g/mL,醇沉濃度80%,調節pH至5,總生物堿含量可達6.48mg/g,收率2.70%。小檗堿具有抗炎、鎮痛、降血壓、降血糖等作用,林慧彬等以小檗堿和總生物堿的含量為考察指標,研究了采用醇沉技術精制黃連解毒湯的方法,確定濃縮液相對濃度0.24g/mL,醇沉濃度40%,靜置冷藏24h,小檗堿和總生物堿的含量分別達到10.59mg/g,173.90mg/g。
  2、黃酮類成分
  黃酮類化合物在植物界分布廣泛,常以游離態或與糖結合成普形式存在,一般能溶于水或稀乙醇、甲醇等有機溶劑,具有很強的生理活性,具有降低血脂、保肝、抗炎、抗菌、擴冠等多重作用。腫節風中所含總黃酮具有抗腫瘤活性,任榮軍等采用均勻設計的方法,以草珊瑚總黃酮為考察指標,優選了腫節風的醇沉工藝,結果為水提液濃縮濃度為0.6g/mL,醇沉濃度50%,總黃酮保留率約96.5%。銀杏總黃酮能抑制內皮素的活性,寧康健等[7j研究了銀杏葉水煎醇沉液對兔血壓的影響,醇沉條件為銀杏葉水提液濃縮至相對濃度1.0g/mL,醇沉濃度60%,耳緣靜脈注射能使麻醉兔收縮壓、舒張壓降低,對動脈血壓影響較大。陳建真等研究了葛根降糖膠囊水提醇沉的工藝條件,確定醇沉條件水提取液濃縮至相對濃度1.20g/mL,醇沉濃度55%,靜置24h,浸膏中葛根素轉移率67.1%、含量24.36mg/mL。
  3、蕙醌類成分
  蕙醌類化合物在中藥中,尤其是在寥科、寥亞科植物中廣泛存在,游離態大多具有結晶型,不溶或難溶于水,成普后易溶入熱水、乙醇、甲醇中,各種蕙醌及其普類具有明顯的止瀉與抗菌作用。孫玉琦等叫分別采用一次醇沉、多次醇沉、分次醇沉、分級醇沉等5種方法,制備了大黃水提液80%濃度的醇沉產物,并對醇沉物中游離蕙醌、結合蕙醌的含量進行比較,發現多次醇沉提取游離蕙醌最多,分次醇沉提的結合蕙醌最多。茜草含有茜草素、大黃素甲醚等蕙醌類成分,寧康健等叫研究了生茜草和茜草炭醇沉產物對小鼠凝血作用的影響。多功能濃縮提取設備醇沉工藝為水提液濃縮至相對濃度1g/mL,醇沉濃度60%,靜置12h,結果發現茜草水提醇沉液能夠明顯縮短小鼠的凝血時間。涂興明等考察了復方大黃噴霧液中大黃素在醇沉工藝中的含量變化情況,分別采用醇沉濃度60%,70%,80%,發現醇沉產物中大黃素含量呈遞增趨勢,而總量基本無變化。
  4、有機酸類成分
  有機酸廣泛存在于植物體的各部位,果實中多見,一般有酸味,具收斂、固澀、抗菌等作用。有機酸多溶于水、乙醇、甲醇,難溶于弱極性有機溶劑。甘草流浸膏是甘草浸膏水溶化后經二次醇沉,分次靜置過夜所得,醇沉濃度65%,濃氨試液調pH值,甘草酸的含量1.8%以上[pzl。楊海燕等研究了采用醇沉技術純化金銀花中綠原酸的工藝,發現醇沉可有效去除金銀花粗粉中的雜質,最佳醇沉濃度60%,綠原酸收率達90.16%。板藍根是清熱解毒的常用中藥,療效確切,含有苯甲酸、水楊酸等有機酸類成分。板藍根注射液、板藍根沖劑以及大多含板藍根的中成藥制劑均采用水提醇沉法提取富集有效成分。板藍根顆粒是板藍根藥材水提后濃縮至相對濃度1.20g/mL,醇沉濃度60%,加入輔料,制粒,干燥而得。制備過程中指標性成分靛玉紅、靛藍等大量流失,而有機酸類成分大多保留。咽舒飲泡騰片由金銀花、麥冬、玄參、薄荷、甘草等醇沉產物加入檸檬酸、NaHCO3等輔料制備而成,肖衛紅等以綠原酸含量為考察指標,采用單因素考察的方法,優選了金銀花等藥材醇沉工藝,確定最佳工藝為中藥水提濃縮液加乙醇至濃度40%,醇沉時間24h,綠原酸轉化率為79.4%。
  5、多糖類成分
  多糖類成分廣泛存在于動物、植物、微生物中,到目前為止,已有300多種多糖類化合物從天然產物中分離出來,研究表明多糖除了有增強免疫功能、抗腫瘤作用、抗氧化、抗衰老、消化系統保護作用等生物學效應外,還有抗菌、抗病毒、降血糖、降血脂、抗輻射、抗凝血等作用。采用醇沉法從沉淀物中回收多糖是一種簡單而常用方法。鄭亞軍采用正交試驗,優化從椰子花序汁液中純化椰花汁多糖的醇沉工藝參數,結果為粗多糖液濃縮度0.8,加入4倍量85%乙醇,多糖提取率98.00%、含量91.44%。林德祥等以云芝多糖含量為指標,采用正交試驗法優選多孔菌科菌類云芝中云芝多糖的醇沉工藝,確定醇沉條件為水提液濃縮至相對濃度1.25g/mL,加4倍95%乙醇,醇沉溫度25℃,靜置時間24h,云芝多糖含量達35%。陳彥等以多糖含量為指標,對注射用紅參多糖的提取純化工藝進行研究,確定醇沉條件為藥液相對濃度1.0g/mL,醇沉濃度80%,40℃靜置過夜,多糖含量76%以上,粗多糖得率12%左右。
  6、其它類成分
  不銹鋼濃縮提取設備醇沉法還常用于其它天然化合物如皂普、木脂素、可溶性纖維等成分的純化。徐新以柴胡皂普。的含量為考察指標,采用正交試驗法優選柴胡的醇沉工藝,藥液濃縮至相對密度為1.15,加1.5倍量95%乙醇,28℃靜置時間24h,可使柴胡皂普。含量達0.30%。姜怡等以五味子醇甲為指標,采用正交試驗法優選分析五味子水提醇沉的提取純化工藝,五味子醇甲為木脂素類,是五味子中主要活性成分,優選條件為水提液濃縮至相對濃度1.0g/mL,醇沉濃度80%,靜置時間12h,五味子醇甲含量可達4.56%。任平國等采用NaCO3溶液提取,濾液醇沉的方法從豆渣中提取可溶性膳食纖維(SDF),提取條件為NaCO3調節pH至12.4倍體積乙醇醇沉,豆渣中SDF提取率達44.3%。
  綜上可知,大多數的中藥成分都可采用醇沉技術進行純化。醇沉濃度一般在60%~80%之間,所需醇沉濃度由大到小的順序為多糖類、生物堿類、蕙醌類、有機酸類、黃酮類,與絮凝澄清等新技術相比,具有工藝成熟、過程明確、應用廣泛等優點。然而,通過分析發現,在醇沉技術實際應用過程中,有的中藥所含化學成分的水溶性較差,這類中藥是否適合水提醇沉的方法?60%~80%是最常用的醇沉濃度,是否能夠最大限度保留有效成分除去雜質成分?中藥所含化學成分千差萬別,是否可以采用類似的醇沉方式?這就要求對醇沉產物的物理性狀、化學品質以及生物活性等方面進行研究,對中藥醇沉技術做出綜合的評價。
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